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在(zài)日常的(de)微量核酸與蛋白質定量中，大(dà)家都會或多或少的(de)遇到(dào)測量不(bù)準确的(de)問題。這(zhè)有時(shí)來(lái)源于(yú)主觀的(de)判斷，也(yě)可能因爲(wéi / wèi)與其他(tā)方法的(de)對比。樣品的(de)定量結果與預期值出(chū)現一(yī / yì ／yí)定偏差有時(shí)是(shì)正常的(de)事情，可能是(shì)因爲(wéi / wèi)不(bù)同測量方法本身存在(zài)的(de)差異，如使用Nano儀器與Qubit的(de)結果對比，即NQ比（具體可參考“每天都提核酸，聽說(shuō)過NQ比嗎？”），或者使用紫外法對比HPLC的(de)結果。而(ér)對于(yú)單純的(de)使用微量樣品進行基于(yú)紫外法的(de)定量，如果出(chū)現很大(dà)的(de)偏差，則可能是(shì)由于(yú)設備、樣品狀态和(hé / huò)上(shàng)樣操作等多種因素造成的(de)，應當引起重視。
根據Implen對來(lái)自全球的(de)超微量用戶的(de)長期追蹤與統計，我們總結出(chū)了(le／liǎo)可能的(de)四種大(dà)概率原因，希望大(dà)家在(zài)設備使用的(de)過程中多加注意，輕松的(de)使用超微量設備獲得可靠的(de)結果。
光程漂移
超微量設備由于(yú)光程漂移而(ér)産生誤差的(de)可能性占比爲(wéi / wèi)35%，是(shì)第一(yī / yì ／yí)大(dà)可能因素。設備在(zài)使用一(yī / yì ／yí)段時(shí)間後出(chū)現的(de)性能下降，可能是(shì)相對普遍的(de)，而(ér)對于(yú)超微量設備，較大(dà)的(de)變數就(jiù)在(zài)于(yú)光程系統的(de)準确與漂移。各個(gè)品牌都會采用精密的(de)光程設計，精确到(dào)微米級别，但随着設備的(de)使用，細小的(de)部件磨損或漂移也(yě)可能導緻光程的(de)偏差，進一(yī / yì ／yí)步表現爲(wéi / wèi)測量結果的(de)偏差。且這(zhè)種偏差将會被放大(dà)，這(zhè)是(shì)由于(yú)設備的(de)光程虛拟稀釋倍數造成的(de) – 吸光值測量結果需要(yào / yāo)乘以(yǐ)光程倍數，而(ér)同時(shí)誤差也(yě)将被放大(dà)同樣的(de)倍數。
不(bù)同的(de)設備可能有不(bù)同的(de)光程切換設計，一(yī / yì ／yí)些結構在(zài)切換的(de)過程中将會産生機械切割，需要(yào / yāo)通過維護和(hé / huò)光程校準，修複偏差，可參考廠家的(de)說(shuō)明書或維護指南。Implen所采用的(de)真實光程技術：即錨定光程切換技術，采用電磁彈片的(de)切換方式，在(zài)兩個(gè)精确定義的(de)光程間切換，無中間位置，可确保光程的(de)準确性，而(ér)無需進行維護和(hé / huò)光程校準。
混勻問題&濁度
樣品的(de)均質性是(shì)濃度測量的(de)前提，由于(yú)混勻或濁度的(de)問題導緻的(de)測量誤差，可能性占比達30%。以(yǐ)正确的(de)方式混勻樣品，是(shì)測量前的(de)必要(yào / yāo)步驟，可通過渦旋、離心、震蕩、彈撥樣品管等多種方式實現。一(yī / yì ／yí)些特殊樣品，槍頭取樣的(de)位置不(bù)同也(yě)可能導緻測量結果不(bù)同，如易産生濃度梯度或易沉降的(de)樣品。一(yī / yì ／yí)些樣品中具有一(yī / yì ／yí)定的(de)濁度，雖然可通過背景校正進行修正，但仍不(bù)能排除由此導緻的(de)測量誤差，濃度測值通常會偏高，需要(yào / yāo)進行具體評估。在(zài)嚴格的(de)場合下，可通過雙波長或多元散射校正的(de)方式進行修正。NanoPhotometer®具有濁度警告功能，可提示用戶較差的(de)樣品質量和(hé / huò)潛在(zài)問題。
樣品&上(shàng)樣問題
有時(shí)樣品本身是(shì)存在(zài)問題的(de)，和(hé / huò)上(shàng)樣問題一(yī / yì ／yí)起達到(dào)了(le／liǎo)20%的(de)誤差可能性占比。如一(yī / yì ／yí)些溶解在(zài)高鹽緩沖液或在(zài)待測波長處具有吸收的(de)緩沖液中的(de)樣品。在(zài)空白測量的(de)時(shí)候，實際上(shàng)引入了(le／liǎo)空白基線的(de)不(bù)确定度，樣品測值時(shí)可能會不(bù)穩定，甚至會出(chū)現負數。因此，樣品成分要(yào / yāo)具備方法學适用性。如果确實存在(zài)一(yī / yì ／yí)些具有共同吸收的(de)成分，則需要(yào / yāo)具體評估結果的(de)可靠性，或降低置信預期。
一(yī / yì ／yí)些錯誤的(de)操作習慣，尤其是(shì)上(shàng)樣手法，将影響測量結果。如習慣使用槍頭塗抹樣品，這(zhè)将導緻樣品過于(yú)平鋪在(zài)樣品台上(shàng)，實際用于(yú)檢測的(de)樣品量可能減少，無法形成液柱，或不(bù)滿足實際樣品體積。一(yī / yì ／yí)些容易有氣泡的(de)樣品，如溶解在(zài)甘油中的(de)蛋白質樣品，移液時(shí)應避免吸入氣泡。黏度較高的(de)樣品可利用反向移液，避免吹出(chū)氣泡。
樣品蒸發
在(zài)一(yī / yì ／yí)些場景下，樣品蒸發的(de)問題将産生可觀的(de)偏差。如設備放置在(zài)空調出(chū)風口，樣品液柱不(bù)可避免的(de)産生蒸發，将得到(dào)偏高的(de)檢測結果（但純度比值通常不(bù)會改變）。一(yī / yì ／yí)些設備如需在(zài)層流或生物安全櫃中使用，将影響更大(dà)。因此，設備的(de)放置位置需要(yào / yāo)遵循廠家的(de)手冊，避免這(zhè)些外部因素影響（包括震動）。采用樣品壓縮法的(de)Implen産品，采用封閉的(de)檢測環境，可避免測量過程中蒸發的(de)影響，更可适用于(yú)微量樣品動力學分析等應用。對于(yú)一(yī / yì ／yí)些含有有機溶劑成分的(de)樣品，蒸發的(de)影響更加可觀，一(yī / yì ／yí)些因素共同作用，可能導緻很大(dà)的(de)偏差。
以(yǐ)上(shàng)四類原因是(shì)導緻微量分光光度計産生測量誤差的(de)常見可能因素，有時(shí)候可能是(shì)多種因素共同作用導緻測量偏差較大(dà)，充分了(le／liǎo)解設備的(de)原理、操作方法和(hé / huò)樣品狀況，有助于(yú)獲得更加可靠的(de)數據。找出(chū)原因，對症下藥，優化實驗過程，更加輕松、省心的(de)進行測量。關于(yú)超微量的(de)任何問題，您都可以(yǐ)咨詢德國(guó)IMPLEN。
