免疫治療

免疫檢查點（Immune checkpoint）是(shì)免疫系統的(de)調節器。這(zhè)些通路對自我耐受很重要(yào / yāo)，自我耐受可以(yǐ)防止免疫系統不(bù)加選擇地(dì / de)攻擊細胞。腫瘤細胞或腫瘤組織往往會利用一(yī / yì ／yí)些手段激活免疫檢查點，使抗原不(bù)能被T細胞識别，從而(ér)抑制了(le／liǎo)T細胞的(de)免疫學作用，逃避了(le／liǎo)機體的(de)免疫監視。

針對腫瘤免疫逃逸開發的(de)抗腫瘤免疫療法中，免疫檢查點阻斷劑已被證實對多種癌症治療相當有效，例如CTLA-4、 PD-1相關藥物等。但由于(yú)原發性或獲得性耐藥的(de)原因，這(zhè)類藥物對部分患者治療無效。的(de)研究表明，一(yī / yì ／yí)些表觀遺傳調節因子(zǐ)參與了(le／liǎo)抑制抗腫瘤免疫反應，說(shuō)明表觀遺傳療法或可增強抗腫瘤免疫反應，并克服對現有免疫療法的(de)抵抗。

2021年10月20日，來(lái)自耶魯大(dà)學癌症中心的(de)嚴欽團隊在(zài)Nature上(shàng)發表文章。該文章發現KDM5B通過作用于(yú)逆轉錄元件，促進腫瘤免疫逃逸。結果揭示，阻斷KDM5B或阻斷KDM5B-SETDB1相互作用，可以(yǐ)有效提高抗腫瘤免疫反應，克服免疫檢查點抑制劑治療抵抗。

KDM5家族蛋白是(shì)一(yī / yì ／yí)類去組蛋白甲基化酶，是(shì)KDM5 4種亞型中的(de)一(yī / yì ／yí)種，它參與基因的(de)表觀遺傳調控過程。KDM5酶對于(yú)耐藥性的(de)出(chū)現起到(dào)了(le／liǎo)重要(yào / yāo)作用，敲除編碼KDM5酶（包括KDM5A與KDM5B）的(de)基因或者是(shì)使用KDM5酶抑制劑，可以(yǐ)激活幹擾素信号通路，增強免疫應答。

研究團隊通過Gene Ontology (GO)分析技術發現KDM5B的(de)表達與免疫系統過程中的(de)基因呈負相關，然後使用免疫原性YUMMER1.7小鼠黑色素瘤模型對Kdm5b缺失造成的(de)影響進行了(le／liǎo)一(yī / yì ／yí)系列評估，并借助測序的(de)方法發現KDM5B激活了(le／liǎo)I型幹擾素反應的(de)途徑，以(yǐ)及對逆轉錄元件的(de)作用情況。作者利用人(rén)黑色素瘤細樣本進行了(le／liǎo)驗證。

通過文章發現，作者文章有兩個(gè)關鍵性支撐點：

1. 在(zài)患者樣本中發現了(le／liǎo)KDM5B的(de)作用；

2. KDM5B作用點在(zài)逆轉錄原件實現表觀遺傳調控。

在(zài)這(zhè)兩個(gè)數據支撐點上(shàng)，均采用了(le／liǎo)TissueGnostics公司的(de)全景組織定量分析技術，不(bù)但在(zài)原位數據中精準獲得了(le／liǎo)單細胞水平的(de)蛋白表達強度定量數據，還通過抗雙鏈RNA抗體對RNA表達水平進行了(le／liǎo)定量分析。發表了(le／liǎo)觀點：KDM5B通過作用于(yú)逆轉錄元件，促進腫瘤免疫逃逸。

實驗部分

爲(wéi / wèi)了(le／liǎo)避免測序及生物信息學分析數據帶來(lái)的(de)不(bù)确定性，作者團隊使用了(le／liǎo)免疫組化和(hé / huò)免疫熒光技術，在(zài)組織學原位進行了(le／liǎo)驗證，在(zài)關鍵的(de)環節中，還利用奧地(dì / de)利TissueGnostics公司全景組織流式定量分析技術，進行圖像采集和(hé / huò)定量分析。爲(wéi / wèi)了(le／liǎo)體現數據的(de)客觀與精準性，作者用了(le／liǎo)大(dà)篇幅對這(zhè)個(gè)技術方法進行了(le／liǎo)詳細描述：

利用5X物鏡進行全景預覽，然後20X物鏡對識别的(de)組織區域進行全景掃描成像。再将獲取的(de)組織全景圖像導入分析軟件中，原位單細胞識别及定量分析技術識别陽性細胞及平均強度。其結果通過散點圖與直方圖呈現。利用正反向回溯功能實時(shí)調節cut-off線。

正反向回溯功能：組織、細胞數據分析中運用正反向回溯功能，支持從圖像到(dào)數據的(de)正向分析，也(yě)支持從數據結果到(dào)圖像的(de)反向回溯驗證，将影像與分析結果緊密結合，實現數字化圖像、散點圖及數據間的(de)三方面實時(shí)聯動。對數據有效性進行獨立重複的(de)驗證，精準衡量組織細胞信号拆分辨識結果，保障樣本識别的(de)精度、陽性率劃分的(de)阈值或是(shì)追溯陽性信号在(zài)組織中的(de)原位信息的(de)可靠性，更進一(yī / yì ／yí)步幫助研究者定位分化幹細胞等稀有細胞亞群。

01

作者采用免疫熒光染色的(de)組織樣本，結合抗PD-1治療之(zhī)前的(de)黑色素瘤樣本進行轉錄組分析，發現對免疫檢查點（immune checkpoint blockade，ICB）有反應的(de)患者KDM5B染色較弱，缺乏可檢測到(dào)的(de)KDM5B高黑色素瘤細胞，而(ér)對ICB有反應的(de)患者有KDM5B高黑色素瘤細胞的(de)主要(yào / yāo)亞群。這(zhè)些結果表明KDM5B與腫瘤炎症水平呈負相關，可能是(shì)腫瘤免疫抑制劑響應低的(de)生物标志物，靶向KDM5B可能誘導T細胞浸潤并克服對ICB的(de)耐藥性。

Figure 1治療前黑色素瘤免疫熒光樣本melanoma cocktail（綠色）、KDM5B（紅色）和(hé / huò)DAPI（藍色）

A-C：抗PD-1治療的(de)3名PD-1無應答患者的(de)免疫熒光圖像；D-F：3名完全應答患者的(de)免疫熒光圖像。G：腫瘤微環境中KDM5B和(hé / huò)黑色素瘤标記物的(de)平均強度散點圖。KDM5B和(hé / huò)黑色素瘤标記陽性的(de)細胞位于(yú)右上(shàng)象限。

02

作者研究了(le／liǎo)KDM5B抑制逆轉錄元件表達情況，針對RNA水平的(de)驗證，使用了(le／liǎo)抗雙鏈RNA單抗-J2抗體，在(zài)KDM5B表達水平低的(de)應答者中檢測到(dào)比那些KDM5B水平高的(de)無應答者更高水平的(de)雙鏈RNA。

Figure 2KDM5B缺失誘導内源性逆轉錄酶元件表達并形成dsRNA

用J2抗體（紅色）和(hé / huò)DAPI（藍色）對免疫檢查點抑制劑完全應答或無應答患者的(de)代表性患者的(de)dsRNA進行免疫熒光染色（左側）和(hé / huò)定量（右側）。